牛血清白蛋白是實驗室中廣泛使用的蛋白質工具，常用于生物化學、分子生物學、細胞生物學等領域。其功能多樣，可作為標準蛋白、穩(wěn)定劑、載體蛋白或陰性對照。以下從儲存、配制、實驗應用及注意事項等方面詳細闡述其使用細節(jié)。

　　一、基本特性與適用場景

　　BSA是從牛血清中提取的球蛋白，占血清蛋白總量的60%，分子量約66 kDa，等電點4.7-5.2。其核心作用包括：

　　- 標準化蛋白：用于Bradford、BCA等蛋白濃度測定方法的參考標準。

　　- 穩(wěn)定劑：維持酶、抗體、核酸等生物活性物質的穩(wěn)定性，減少吸附損失。

　　- 封閉劑：在Western Blot中封閉膜上非特異性結合位點。

　　- 細胞培養(yǎng)添加劑：提供氨基酸、緩沖能力及營養(yǎng)支持。

　　- 載體蛋白：輔助脂質體、納米顆粒等制劑的分散與穩(wěn)定。

　　二、儲存與分裝規(guī)范

　　1. 儲存條件

　　- 干粉形式：-20℃密封保存，避免吸潮或污染。

　　- 溶液形式：4℃短期保存(建議1周內(nèi)用完)，長期需分裝后-80℃凍存，避免反復凍融(最多3次)。

　　- 關鍵提示：反復凍融會導致BSA聚合或降解，影響實驗結果。

　　2. 分裝建議

　　- 根據(jù)實驗需求將干粉分裝為小份(如1 g/管)，避免多次取用造成污染。

　　- 配制后的溶液建議用0.22 μm濾膜過濾除菌，并標注濃度、日期及用途。

　　三、溶液配制要點

　　1. 溶劑選擇

　　- 常用溶劑：超純水、PBS(pH 7.2-7.4)或生理鹽水。

　　- 避免使用含強酸/堿、還原劑(如DTT)或變性劑(如SDS)的溶液直接溶解BSA。

　　2. 配制步驟

　　- 稱重：精確稱取BSA干粉(如1 g、5 g)，避免吸潮結塊。

　　- 溶解：緩慢加入溶劑，磁力攪拌至溶解(可4℃過夜攪拌)。

　　- 過濾：用0.22 μm濾器滅菌，分裝后標記濃度(如10 mg/mL)。

　　- 驗證濃度：通過紫外分光光度法(A280 nm，消光系數(shù)1.0)或BCA法校準實際濃度。

　　3. 濃度范圍

　　- 常規(guī)用途：0.1%-2%(w/v)，例如1 mg/mL用于封閉，10 mg/mL用于濃縮儲備液。

　　- 高濃度溶液可能因鹽離子或pH不當導致沉淀，需優(yōu)化溶劑條件。

　　四、實驗應用場景

　　1. 蛋白定量標準品

　　- 用于Bradford或BCA法時，需制備梯度稀釋的標準曲線(如0-2000 μg/mL)。

　　- 注意：不同批次BSA可能因純度差異導致標準曲線偏移，建議同一實驗使用同一批號。

　　2. 酶或抗體的穩(wěn)定劑

　　- 在酶反應體系中添加0.1%-0.5% BSA，可減少酶在塑料表面的非特異性吸附。

　　- 抗體稀釋液中加入BSA(如1%-5%)可提高穩(wěn)定性，但需驗證是否干擾后續(xù)檢測(如ELISA)。

　　3. Western Blot封閉液

　　- 配方示例：5% BSA + TBS-T(室溫振蕩1小時)。

　　- 替代方案：若需低背景，可用脫脂奶粉或Casein替代，但BSA更適合磷酸化蛋白檢測。

　　4. 細胞培養(yǎng)補充劑

　　- 添加濃度：0.1%-1%(w/v)，需確保無支原體污染。

　　- 注意：某些細胞系對BSA敏感，需測試兼容性(如原代神經(jīng)元培養(yǎng))。

　　5. 脂質體或納米顆粒制備

　　- 作用：包裹疏水藥物或RNA，減少聚集。

　　- 典型條件：BSA與脂質質量比1:10，超聲前混合均勻。

　　五、注意事項與常見問題

　　1. 防污染與失活

　　- BSA溶液易滋生細菌，建議添加0.01%-0.05%疊氮鈉(NaN3)防腐，但避免用于細胞培養(yǎng)。

　　- 變質特征：溶液渾濁、沉淀或異味，需立即丟棄。

　　2. 批次差異與純度

　　- 不同品牌或批次的BSA可能存在純度差異(如脂肪酸、內(nèi)毒素含量)，關鍵實驗需預測試。

　　- 高純度級別(如透析級、低內(nèi)毒素)適用于細胞實驗，普通級可用于蛋白定量。

　　3. 沉淀問題

　　- 原因：溶劑pH偏離中性、高濃度鹽離子、金屬離子殘留或低溫儲存析出。

　　- 解決方案：調(diào)節(jié)pH至7.0-7.5，加入EDTA螯合金屬離子，或適當降低濃度。

　　4. 兼容性測試

　　- 使用BSA作為添加劑時，需驗證是否干擾檢測信號(如熒光標記、ELISA顯色)。

　　- 例如：高濃度BSA可能淬滅某些熒光染料，需優(yōu)化濃度。

　　六、特殊場景優(yōu)化方案

　　1. 高溫/變性環(huán)境

　　- BSA在60℃以上易變性，如需用于高溫反應體系，可選擇熱穩(wěn)定性更高的重組蛋白(如GroEL)。

　　2. 低濃度蛋白保護

　　- 當目標蛋白濃度極低時，添加0.1% BSA可減少吸附損失，但需平衡背景噪音。

　　3. 去除內(nèi)毒素

　　- 細胞實驗中使用的BSA需為低內(nèi)毒素級(<3 EU/mg)，可通過凝膠色譜或親和層析進一步純化。