細胞培養需要提供合適的溫度和氣體環境，因此一般采用培養箱的形式來滿足細胞培養的要求。

 

細胞培養的具體步驟：

 

1、細胞復蘇

 

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM*培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

 

加入10ml DMEM培養基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM*培養基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

 

2、細胞傳代

 

細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加人1ml DMEM*培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。

 

加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

 

3、細胞凍存

 

細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM*培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。

 

加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。